Proteinen arazketa helburu jakin baten proteina-zatikiak ehun, zeluletatik edo proteinen nahasketen bidez bereizteko prozesua da. Proteinen arazketa proteina isolatuaren garbitasun sendoa izateaz gain, proteinen jarduera biologikoa ere mantentzen du. Hori dela eta, konbinazio araztegi bat edo gehiago diseinatu behar da proteina propietate desberdinen arabera. Proteinen arazteko estrategia nagusia proteina desberdinen arteko antzekotasunak eta desberdintasunak ustiatzea da. Proteinen arteko antzekotasuna oinarri hartuta, proteina ez den materiala kendu daiteke eta, ondoren, proteina proteina bereiz daiteke proteinen desberdintasunetan oinarrituta. Batez ere ingeniaritza genetikoaren teknologia garapen azkarrarekin, nahiz eta proteina asko birkonbinazio genetikoaren bidez adierazten den arren, proteina arazketa maila zuzenean lotuta dago proteinen garbitasunarekin eta jarduerarekin. Hori dela eta, proteinen arazketa gai garrantzitsua da bioteknologia modernoan.
Objektibo
Alde batetik, proteinen isolamendua eta arazketa bereziki garrantzitsuak dira proteinen egitura eta funtzioaren azterketa sakona egiteko, eta, bestetik, proteinak bereiztea eta araztea ere lotuta daude proteinen aplikazioaren eraginarekin. Hori dela eta, proteinen arazketak funtsezko garrantzia du zientzia biologikoen ikerketa eta aplikazioan, eta proteinen bereizketa eta arazketa teknologia teknologia funtsezkoa da industria biologikoan.
Bidea
Proteinen araztegiaren printzipioa xede proteina zentzuzko eraginkortasunarekin, tarifarekin, errendimenduarekin eta garbitasunarekin bereiztea da, jarduera biologikoa eta osotasun kimikoa mantenduz. Urrats nagusiak material esperimentalen, pretazio, proteinen erauzketa, proteina gordinen sailkapena, proteina fina sailkatzea eta proteina identifikatzea dira.
Arazoak izan behar du arazketa prozesuak: 1 proteinen jardueraren gaineko eragina minimizatzeko, hala nola, pH, tenperatura altuko eta metalezko efektu handiegiak ekiditeko; 2. funtzionatu tenperatura baxuan; 3. Saiatu proteina eduki nagusia laginean mantentzen.
Sailkapena
Proteinen arazketa arazketa metodo motaren arabera sailka daiteke:
I. Prezipitazio metodoa, gatz deposizioa barne, gatz ioiak erabiliz, proteinen gainazalean geruza solidifikatua suntsitzeko, eremu hidrofoboa azaleratzeko eta, ondoren, aurretiazko arazketa helburua lortzeko. Gordailu organikoek, uraren jarduera murrizteko disolbatzaile organikoak erabiliz, proteina gainazalean dagoen film koagulatua suntsitzen du, proteina prezipitazioak sortzea. Prezipitazioa arazketa metodo arina da, baina garbitasuna ez da altua eta lehen arazketa prozesu gisa erabil daiteke.
Bi, dialisi metodoa, dialisi poltsa eta ultrafiltrazio metodoa barne. Dialisi eta ultrafiltrazioaren arabera, ezpurutasun molekular txikiak ezabatu daitezke, eta proteina konponbidea ere ordezkatu daiteke.
3. Metodo kromatografikoen artean, kromatografikoen kromatografia, ioia trukatzeko kromatografia, afinitate kromatografia (metalezko afinitatearen kromatografia (metalezko afinitatearen kromatografia, proteina a / g kromatografia, hartzailearen proteina, substratu, etab.), Kromatografia hidrofoboa eta errendimendu handiko kromatografia. Emaitza hobeak lortzeko, bi metodo kromatografikoen konbinazioa, esaterako, afinitate kromatografia eta ioi trukeko kromatografia, askotan behar da.
Aurreko metodoekin batera, beste arazketa metodo asko daude, hala nola dentsitate gradiente zentrifugazioa, garbitasun handiko proteinak ekoizteko egokiak direnak, baina baldintza esperimental handiagoak behar dituzte. Proteinen kristalak egokiak dira egitura biologikoaren analisirako, adibidez X-Transmission.
Ordua: 01-07-07