Proteinen adierazpenaren ikuspegi orokorra

Proteinexpresioak xede genea bektore artifizial bihurtzeko teknologia aipatzen du eta gero proteina sistema heterologoan proteina adierazteko zelula edo zelula gabeko sistema sartzea aipatzen da.

Proteinen adierazpenak bertako proteinak lortzeko zailak diren arazoa konpondu dezake. 1970eko hamarkadan proteina adierazpen heterologoa sortu zenetik, milaka proteina birkonbinatzaile arrakastaz adierazi dira, bioteknologiaren eta ikerketa eta industria biomedikoen etengabeko garapena sustatzen dutenak.

Helburua:

Proteinen adierazpenaren bidez, posible da iturri naturaletatik lortutako proteinak lortzea.

Bigarrenik, proteinen adierazpen produktuen sorta handia eta garbitasun handia, xede proteinen azterketa errazten du, baina kostua ere asko murrizten du.

Are garrantzitsuagoa da, proteina birkonbinanteak normalean ostalariaren biosegurtasun handia adierazteko hautatzen dira, eta, beraz, ostalari patogenoen biosegeniko arrisku potentzial batzuk ekiditeko.

Metodoa:

Batez ere gene zatien erreplikazio prozesuak, espresio sistemaren sarrera, induzitutako adierazpena, produktuaren arazketa eta analisia aurkeztea da.

Proteinen adierazpenaren ikuspegi orokorra

Sailkapena:

Proteinen adierazpen sistemak orokorrean banatu daitezke:

1. Espresio nuklearraren sistema: Escherichia Coli proteina espresio sistema ohikoena da, hau da, atzeko plano genetiko garbiaren, ugalketa egokia, kostu baxua eta adierazpen altua dituen abantailak ditu. Hala ere, itzulpen-aldaketaren mekanismoa falta da eta ez da egokia glukosilaziorako edo hautapen puntu bereziko puntuetarako proteina adierazpena aldatzeko. Bacillus Subtilis proteinen adierazpenerako ere erabil daiteke, eta bere abantailak adierazpen metaboliko sendoak eta proteasa jarduera baxua dira, pixkanaka arreta erakarri duena.

2. Eukaryoty Adierazpen Sistema: itzulpenaren ondoren nolabaiteko glukosilazio maila lor daiteke, proteina eukariotikoen jarduera naturaletik gertuago dagoena. Batez ere barne hartzen da. ① Legamia espresio sistema (legamia gorri arrunta, legamia arrunta, eta abar), dentsitate handiko lekua izan daiteke, itzulpenaren ondoren alda daiteke, prokarioto eta eukariotikoen zelulen abantailak ditu eta proteina adierazpen sistema ona da. ② Intsektuen zelulen adierazpen sistema: gene exogenoak bakulovirus bektorearen bidez intsektuen zeluletan transferitzen dira. Proteina eukariotikoetarako adierazpen sistema altua da, hau da, mintz proteinak, proteina makromolekularrak, proteina-kinakseak eta sistema prokariotoan adierazteko zailak diren beste proteinak. ③ MamiLiako zelula espresio sistema: mami-zelulen itzulpen eta dekorazioaren eraginkortasuna legamia eta intsektuen zelula sistemak baino askoz ere handiagoa da. Mami-zelulen egitura eta funtzioa jatorrizko proteina eukariotikoengandik gertuago daude, baina adierazpen maila baxua da eta kostua altua da.

3. Zelularik gabeko adierazpen sistema: Xede-proteinak partikuletatik eta PCR produktuetatik zuzenean adieraz daitezke, eta espresio-sistema Escherichia Coli-tik, Rabbit Reticulokitoak eta abar dira, beste sistema batzuetako sistemetan eta automatizazioan dauden produktuak adierazteko gaitasuna da, baina adierazpen baxua eta kostu txikia da.