Aurrekariak
Melanotan I, Afamelanotide izenez ere ezaguna, 13 aminoazidoz osatutako polipeptido lineal bat da, eta farmazia ikerketan gero eta garrantzi handiagoa izango du. Melanotan I-ren ingelesezko lehen izenak Melanotan-1 eta Afamelanotide dira. α-melanozitoak estimulatzen dituen α-MSH hormonaren analogo sintetiko gisa), Melanotan I protoporfiria eritropoietikoak eragindako fotosentsibilitate-nahasteak tratatzeko erabil daiteke. Gaur egun, Melanotan I produktu gehienak ikerketa-erabilerarako soilik etiketatuta daude eta oraindik ez daude giza aplikaziorako pentsatuta. Fase solidoko sintesi tradizionalean, erretxina aukeratzeak nabarmen eragiten du produktuaren akoplamendu eraginkortasunean eta azken garbitasunean.
Oinarrizko informazioa
Txinako izena: Melanotan 1
Ingelesezko izena: Melanotan-1
Enpresa zk.: GT-A006
CAS zenbakia: 75921-69-6
Sekuentzia: SYS{Ne}EH{D-Phe}RWGKPV-NH2
Formula molekularra: C78H111N21O19
Pisu Molekularra: 1646,88
Prestaketa metodoa
I. Fmoc-Val-Amino Erretxina prestatzea
1. urratsa:Pisatu 11,11 g (5 mmol) Ramage Amide AM erretxina 0,45 mmol/g-ko ordezkapen-mailarekin eta gehitu fase solidoko erreaktore batera. Gehitu DCM erretxina puzteko 30 minutuz, ondoren xukatu. Garbitu hiru aldiz DMFarekin. Gehitu %20 piperidina (v/v) duen DMF disoluzioa eta erreakzionatu 5 minutuz. Gehitu beste %20ko piperidina DMF disoluzioa eta erreakzionatu 10 minutuz, tartean DMF garbiketa batekin. Erreakzioa amaitu ondoren, xukatu eta hiru aldiz garbitu DMF-rekin.
2. urratsa:Disolbatu 5,09 g Fmoc-Val-OH, 2,02 g HOBT (1-hidroxibenzotriazol) eta 2,32 ml DIC (N,N'-diisopropylcarbodiimide) DMFn 0 °C-tan. Guztiz disolbatu ondoren, gehitu nahasketa erreakzio zutabean eta erreakzionatu giro-tenperaturan ordubetez. Jarraitu erreakzioaren aurrerapena ninhidrina proba erabiliz, emaitza negatiboa ziurtatuz. Erreakzioa amaitu ondoren, hiru aldiz garbitu DMFrekin Fmoc-Val-amino erretxina lortzeko.
II. Melanotan I-ren guztiz babestutako erretxina peptidoa prestatzea.
1. urratsa:Gehitu % 20 piperidina DMF disoluzioan (bolumen-erlazioa) goiko Fmoc-Val-aminoresinari. Erreakzionatu 5 minutuz, ondoren gehitu % 20ko piperidinaren beste zati bat DMF disoluzioan eta erreakzionatu 10 minutuz. Garbitu behin DMFarekin tartean. Erreakzioa amaitu ondoren, lehortu hutsean eta hiru aldiz garbitu DMF-rekin.
2. urratsa:Disolbatu 5,06 g Fmoc-Pro-OH, 2,02 g HOBT (1-hidroxibenzotriazol) eta 2,32 ml DIC (N,N'-diisopropilkarbodiimida) DMFn 0 °C-tan. Guztiz disolbatu ondoren, gehitu nahasketa erreakzio zutabean eta erreakzionatu giro-tenperaturan ordubetez. Jarraitu erreakzioaren aurrerapena ninhidrina proba erabiliz (Kaiser proba) emaitza negatiboak lortu arte. Amaitutakoan, hiru aldiz garbitu DMFrekin Fmoc-Pro-Val-aminoresin lortzeko.
3. urratsa:2. urratsean deskribatutako metodoari jarraituz, sekuentzialki lotu aminoazido bakoitza Melanotan I-ren sekuentziaren arabera. Ac-Ser(tBu)-OH akoplamendu erreakzioa amaitu ondoren, garbitu hiru aldiz DMFrekin, hiru aldiz DCM (diklorometanoarekin) eta hiru aldiz metanolarekin. Lehortu hutsean, guztiz babestuta dagoen Melanotan I erretxinarekin loturiko peptido 23,89 g lortzeko.
III. Melanotan I Peptido gordinaren prestaketa
Guztiz babestutako Melanotan I erretxinarekin loturiko peptido 23,89 g hondo biribileko matraz batean jarri ziren. 0 °C-tan, aldez aurretik prestatutako mozketa koktel baten 250 ml (TFA:tioanisol:fenol:triisopropilsilano:ura = 82,5:7,5:5:3:2 bolumenez osatua) poliki-poliki gehitu ziren irabiatuz. Nahastea tenperatura baxuan erreakzionatu zen 0,5 orduz, eta ondoren giro-tenperaturan erreakzionatu zen 2 orduz. Ondoren, zatiketa disoluzioa hutsean iragazi zen. Disoluzio hau poliki-poliki gehitu zen 2 litro izotz dietil eter anhidroari irabiatuz. Peptido gordina filtrazio bidez isolatu, hiru aldiz garbitu izotz-eter dietilarekin eta 8,55 g Melanotan I peptido gordina lortu zen.
IV. Melanotan I araztutako peptidoaren prestaketa
1. urratsa:Melanotan I peptido gordina 100 ml araztutako uretan disolbatu eta 0,45 μm-ko mintz batetik iragazi peptido-disoluzio gordina lortzeko.
2. urratsa:Purifikatu Melanotan I peptido gordina errendimendu handiko kromatografia likidoa (HPLC) erabiliz. Erabili DAC-HB50 konpresio axial dinamikoko zutabea A fase mugikorra (% 0,05 azido trifluoroacetic ur-disoluzioa) eta B fase mugikorra (% 0,05 azido trifluoroacetic azetonitriloan). Egin gradienteko eluzioa bereizteko eta arazteko. Detektatu lagina UV detektagailu baten bidez eta jaso xede-gailurrari dagokion disoluzio peptidikoa frakziotan.
3. urratsa:HPLC arazketa ondoren, lortu 180 ml Melanotan I trifluoroacetato disoluzio % 99tik gorako purutasunarekin. Kontzentratu disoluzioa 50 ml-ra lurrunketa birakari bidez.
4. urratsa:Kromatografia-zutabea ur deionizatuarekin orekatu eta Melanotan I trifluoroacetato disoluzio araztuaren 50 ml kargatu (garbitasuna > %99). Eluatu 50 minutuz %2ko azido azetikoko ur-disoluzio-sisteman. Bildutako xede-produktua 80 ml-ra kontzentratu birakari-lurrunketa bidez. Egin aurreizozketaren lehorketa eta liofilizazioa azken finean Melanotan I araztutako peptido 5,33 g lortzeko, % 32,33ko etekinarekin.
Argitalpenaren ordua: 2026-01-05