Limulus erreaktiboa tripeptidoa/endotoxina substratua lantzeko printzipioa eta prestaketa

Limulus erreaktiboa tripeptidoa ferra karramarroaren odol-zelulen lisatutik ateratako edo artifizialki sintetizatutako sekuentzia espezifiko bat duen substantzia tripeptidikoa da. Limulus erreaktiboa tripeptidoa analisi kuantitatiboetarako erabiltzen den substratu kromogenikoa da (adibidez, bakterioen endotoxina proba), bakterio Gram-negatiboen osagaiak detektatzeko eta neurtzeko.—endotoxinak. Endotoxinek aktibatutako entzimek eragiten dutenean, koloretako konposatu bat askatzen da (p-nitroanilina adibidez), kolorearen intentsitatea neurtu eta endotoxina edukiarekin erlazionatu ahal izateko.

Lan-printzipioa

Endotoxinen aktibazioa: endotoxinen presentzian, karramarroaren odoleko amebozitoek entzimak askatzen dituzte, eta horrela koagulazio-jauziak eragiten dituzte.

Entzimaren Ekintza: aktibatutako entzimak (normalean koagulazio-entzima) substratu kromogeniko batean jarduten du.

Erreakzio kromogenikoa: entzimak substratua zatitzen du, p-nitroanilina (pNA) izeneko konposatu horia askatuz.

Analisi kuantitatiboa: kolore horiaren intentsitatea laginaren endotoxina edukiarekiko proportzionala da eta normalean 405 nm-ko absorbantzian espektrofotometro baten bidez neurtzen da.

Prestaketa metodoak

Limulus erreaktiboen tripeptidoa bi ikuspegiren bidez lor daiteke prestaketari dagokionez.

1. Limulus odol-zeluletatik osagai naturalak ateratzea eta bereizketa eta arazketa bidez tripeptido aktiboa lortzea.

2. Fase solidoko sintesi-teknologia erabiltzea aminoazido-sekuentzia zehatzak sekuentzialki konektatzeko, tripeptidoaren egitura zehatz-mehatz kontrolatuz.

Limulus-en kontserbazio-politikak direla eta (Zhejiang, Fujian, Guangdong eta Guangxi bezalako probintziek "babestutako uretako fauna probintzial gisa" zerrendatzen dute / Hong Kong-ek 2012 amaieran hondoko arrastea debekatzen duen araudia eman zuen), eta erauzketa prozesua konplexua eta zaila denez, lehen metodoaren kostua nahiko altua da. Hori dela eta, gaur egun fase solidoko sintesia erabili ohi da. Aminoazido sekuentzia zehatzak sekuentzialki konektatuz, tripeptidoaren egitura zehatz-mehatz kontrolatu daiteke. Metodo honek produktuaren egonkortasuna eta koherentzia bermatzeaz gain, eskala handiko ekoizpena ahalbidetzen du, erreaktiboak probatzeko farmazia-industriaren beharrak asetzeko.