Proteina birkonbinatzaileen antigenoek askotan epitopo desberdin batzuk izaten dituzte, eta horietako batzuk sekuentziako epitopeak dira eta batzuk epitopo estrukturalak dira. Antigeno desnatatuak dituzten animaliak immunizatutako antigorputzak antigorputzak dituzten antigorputzak dira, epitopo indibidualei buruz eta orokorrean erabil daitezke egitura naturalak edo xede proteinak detektatzeko. Immunogenoen izen desnatatuak erabiltzearen alde bat da. Izapidetutako proteinak immunogenikoagoak izan ohi dira eta animalien erantzun immunologiko sendoa estimulatu dezakete.
Esncherichia Coli adierazpen sistema normalean antigenoetarako aukeratzen da, denborari eta diruari dagokionez sistema garestiena delako. Helburuko proteinen adierazpena eta arazketa erosotasuna hobetzeko, batzuetan xede proteinen zati txiki bat baino ez da adierazten, esaterako, domeinu jakin bat, esaterako.
Proteinen hiru dimentsiotako egitura
Proteina baten domeinu espezifikoa
Antigorputzaren prestaketaren xedea WB detekziorako soilik bada, ekonomikoa eta azkarra da, antigeno gisa peptido txiki sintetikoa erabiltzea, baina inmunogenismo ahulak edo ez-erregenikotasuna arriskua dago, segmentu peptidoaren aukeraketa desegokia dela eta. Antigorputzak prestatzeak epe luzea eskatzen duenez, bi edo hiru peptidoaren segmentu desberdinak hautatzen dira antigorputzak polipeptide antigenoak erabiliz esperimentuaren arrakasta tasa ziurtatzeko.
Immunizaziorako polipeptide antigenoaren garbitasuna% 80 baino handiagoa izan behar da. Garbitasun altuagoak teorikoki berariazkotasun hobeak izan ditzakeen arren, praktikan, animaliek beti antigorputzarik ez duten hainbat ugarik sortzen dituzte, eta, beraz, antigenoaren garbitasunaren onurak maskaratzen dituzte beti.
Horrez gain, peptido txikietatik antigorputzak prestatzeak garraiolariaren antigeno egokiak gurutzatu behar ditu bere immunogenizitatea hobetzeko. Bi garraiolari antigeniko arrunt KLH eta BSA dira.
Ordua: 03-07-07