Fluoreszentzia Erresonantzia Energia Transferentzia (Fret)
Fluoreszentzia Erresonantzia Energiaren Transferentzia (Fret) energia-transferentzia ez-transferentziarik gabeko prozesua da. Emaileak estatuaren energia hunkituta dagoen estatuari hunkituta dagoen estatuari transferitzen zaio bikote elektriko intermolekularren elkarrekintzaren bidez. Prozesu honek ez du fotoi inplikatzen eta, beraz, erradiatiboa ez da. Azterketa honek azkarrak, sentikorrak eta sinpleak izatearen abantailak ditu.
Askatasun fretean erabilitako koloratzailea berdina izan daiteke. Baina aplikazio gehienetan, koloratzaile desberdinak erabiltzen dira. Laburbilduz, erresonantzia argitsuen energia transferentzia emailearen (tindaketa 1) dipolatzaile pare bat transferitzea da, emaile-taldea hunkituta dagoenean. Oro har, emaileen fluorofore taldearen emisio-espektroak gainjartzen du Acceptor Taldearen xurgapen espektroarekin. "Bi fluoroforoen arteko distantzia egokia denean (10 - 100 A), fluorofore energia emaileari onarpenera transferitzea ikus daiteke." Energiaren transferentzia metodoa hartzailearen egitura kimikoaren araberakoa da:
1.. Bibrazio molekular bihurtzen da, hau da, energia transferentziaren argi argitsua desagertzen da. (Hartzailearen keinua da)
2. Isurketa hartzaileak bera baino biziagoa da, bigarren mailako fluoreszentziaren espektroan gorrixka bat sortuz. " (Hartzaileak argiztapen argitsuak dira).
Emaileen taldea (EDAK) Gene (Dabcyl) uniformeki lotuta daude GIBaren proteaseko substratu naturalarekin lotuta, eta substratua deskonektatuta ez dagoenean, Dabcyl-ek EDANS-ek ezin ditu fluorinara zuzendu. GIB-1 Deskonektatzean, EDAK Dabcyl-ek ez du jada itzaltzen, eta gero Detektatu daitezke EDNS Luciferases. Proteasa inhibitzaileen eskuragarritasuna EDAKren intentsitate fluoreszentzien aldaketen bidez kontrolatu daiteke.
Fret peptidoak peptidrase ezgaitasuna aztertzeko tresna egokiak dira. Bere erreakzio prozesua etengabe kontrolatu daitekeenez, entzimaren jarduera detektatzeko metodo egokia eskaintzen du. Emaile / Accantor-ek egindako lotura peptidoaren hidrolisiaren ondoren sortutako distirak entzimaren jarduera neurtzen du kontzentrazio nanomolean. Fret peptidoa oso-osorik dagoenean, barruko flash-a bat-bateko desagerpena erakusten du, baina emaile / onarpenaren aurrean dagoen lotura peptidoak apurtzen dituenean, flash bat askatzen du, etengabe antzeman daitekeena eta entzimaren jarduera zenbatekoa izan daiteke.
Ordua: 02/07-07