Fluoreszentzia erresonantzia energia transferentzia (FRET)
Fluoreszentzia erresonantzia-energia transferentzia (FRET) energia-transferentzia ez-erradiatiboaren prozesu bat da, non emaile-egoera kitzikatuaren energia hartzaile-egoera kitzikatura transferitzen den molekula arteko bikote elektrikoen elkarrekintzaren bidez.Prozesu honek ez du fotoirik hartzen eta, beraz, ez da erradiazioa.Azterketa honek azkarra, sentikorra eta sinplea izatearen abantailak ditu.
FRET saiakuntzan erabilitako koloratzailea berdina izan daiteke.Baina aplikazio gehienetan, koloratzaile desberdinak erabiltzen dira benetan.Laburbilduz, erresonantzia argitsuaren energiaren transferentzia emaile-taldea kitzikatuta dagoenean dipolo-pare baten transferentzia da emailea (koloratzailea 1) hartzailera (koloratzailea 2).Oro har, Emailearen fluoroforo taldearen igorpen-espektroa Onartzaile taldearen xurgapen-espektroarekin gainjartzen da."Bi fluoroforoen arteko distantzia egokia denean (10 - 100 A), fluoroforoaren energia emailearen hartzailera transferentzia ikus daiteke".Energia transferitzeko metodoa hartzailearen egitura kimikoaren araberakoa da:
1. Bibrazio molekularra bihurtzen da, hau da, energia-transferentziaren argi argia desagertzen da.(Errezeptorea argi itzaltzailea da)
2. Igorpena errezeptorea bera baino biziagoa da, eta ondorioz, fluoreszentzia-espektro sekundarioan gorri-lehiaketa bat da”.(Errezeptoreak igorle argitsuak dira).
Emaile-taldea (EDANS) eta gene hartzailea (DABCYL) modu uniformean lotuta daude GIB proteasaren substratu naturalarekin, eta substratua deskonektatzen ez denean, DABCYL-ek EDANS itzali dezake eta gero fluorarentzat detektaezin bihurtu daiteke.GIB-1 proteasa deskonektatzean, EDANS jada ez da DABCYL-ek itzaltzen, eta gero EDANS luciferasak detektatu daitezke.Proteasaren inhibitzaileen erabilgarritasuna EDANSen fluoreszentzia-intentsitatearen aldaketen bidez kontrolatu daiteke.
FRET peptidoak tresna egokiak dira peptidasaren espezifikotasuna aztertzeko.Bere erreakzio-prozesua etengabe kontrola daitekeenez, entzimaren jarduera detektatzeko metodo erosoa eskaintzen du.Emaileak/hartzaileak lotura peptidikoen hidrolisiaren ondoren sortutako distirak entzimaren jardueraren neurria ematen du kontzentrazio nanomolarretan.FRET peptidoa osorik dagoenean, barneko flasharen bat-bateko desagerpena erakusten du, baina emaile/hartzailearen parean dagoen edozein lotura peptidiko hausten denean, flash bat askatzen du, etengabe hauteman daitekeena eta gero entzimaren jarduera kuantifikatu daiteke.
Argitalpenaren ordua: 2023-08-14